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  • 微量加樣器(移液器)使用的一般原則
    2011-11-25 1727
    微量加樣器(移液器)使用的一般原則在免疫測定及其他生物醫(yī)學研究中,加樣器的使用離不開一次性的塑料吸頭,盡管一次性塑料吸頭的使用增加了實驗費用,但降低了實驗技術(shù)人員接觸傳染性病原體及有害實驗材料如放射性核素的可能性,并且避免了吸頭多次重復使用所必需的清潔過程和腐蝕性去垢劑的使用。此外,在有些應(yīng)用上,如PCR測定中,吸頭必須是一次性的,以避免潛在污染發(fā)生的可能性。加樣器根據(jù)使用的要求,也在不斷發(fā)展。如可整體高壓滅菌加樣器的出現(xiàn)。使用UV線穩(wěn)定的塑料制作加樣器對于加樣器在許多方面的...

  • 酶標記抗體法標記抗體的制備
    2011-11-22 1621
    酶標記抗體法標記抗體的制備酶標記抗體法(enzaymelabelledantibodytechnique)是用結(jié)合物將酶結(jié)合在抗體分子上,制備成酶標記抗體,通過抗原—抗體反應(yīng)使抗原—抗體復合物上帶有酶分子,再借助酶對底物的特異性催化作用,在抗原—抗體反應(yīng)部位形成不溶性有色產(chǎn)物,用于研究抗原物質(zhì)分布和性質(zhì)。酶標記抗體法又分為直接法和間接法,目前應(yīng)用zui多的酶是辣根過氧化酶(HRP),底物是3,3’—二氨基聯(lián)苯胺(DAB)??贵w蛋白分子與酶分子(如HRP或AKP)以一定的方式相...

  • 哺乳動物細胞的RNAi技術(shù)策略
    2011-11-16 1725
    哺乳動物細胞的RNAi技術(shù)策略目前RNAi技術(shù)已經(jīng)進入了生物科學研究的許多領(lǐng)域,成為了一種主要的生物學研究工具,發(fā)展得相當迅速,并受到了此次諾貝爾獎評審委員會的青睞,獲得2006年諾貝爾獎醫(yī)學/生理獎。然而這一才歷經(jīng)十個年頭的技術(shù)依然對于許多研究人員來說還是很陌生的,以下是有關(guān)RNAi技術(shù)在哺乳動物細胞中應(yīng)用的具體設(shè)計策略,主要來自于《遺傳》雜志2005年“RNA干涉(RNAi)技術(shù)應(yīng)用于哺乳動物細胞的研究策略”,希望能給從事或者準備從事RNAi相關(guān)實驗的研究人員以幫助。哺乳...

  • 生物素-親和素系統(tǒng)(BAS)ELISA和免疫組化技術(shù)
    2011-11-7 3532
    生物素-親和素系統(tǒng)(BAS)ELISA和免疫組化技術(shù)20世紀70年代后期在免疫酶技術(shù)中利用生物素-親和素系統(tǒng)(biotin-avidinsystem,BAS)標記抗體發(fā)展了又一種新型生物反應(yīng)放大技術(shù),即BAS-ELISA技術(shù),它使用生物素-親和素-過氧化物酶復合物作為指示劑,組成一新的生物放大系統(tǒng)進一步提高檢測的敏感度。生物素(biotin)是廣泛分布于動植物體內(nèi)的一種生長因子,又稱輔酶R或維生素H。親和素(avidin)是卵白及某些微生物中的一種蛋白質(zhì),由4個亞單位組成。二...

  • PCR-ELISA法診斷禽流感
    2011-11-3 2038
    PCR-ELISA法診斷禽流感PCR-ELISA是將一步RT-PCR技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附法相結(jié)合,檢測病毒的一項診斷技術(shù)。PCR的一對引物中,其中一個用生物素標記、另一個用地高辛標記,在酶標微孔板上用親和素包被,PCR擴增后純化片段加入微孔板中。此時,微孔板上包被的親和素將與生物素標記引物上的生物素特異性結(jié)合而捕捉了PCR片段,然后在微IL板中加入辣根過氧化物酶標記的抗地高辛抗體,該抗體將與地高辛標記引物上的地高辛結(jié)合,從而形成親和素-生物素-PCR片段-地高辛-地高辛抗體-辣...

  • 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)診斷豬囊尾蚴病病
    2011-11-1 2461
    酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)診斷豬囊尾蚴病病目前實驗室開發(fā)的新型檢測方法主要是以ELISA及改良的ELISA為主。分別用5種不同改良的ELISA平行檢測囊蟲抗體:ABC-ELISA、經(jīng)典ELISA、SPA-ELISA、快速法ELISA和BAELISA,試驗結(jié)果差異不顯著,說明方法學的選擇主要依據(jù)習慣和試驗的目的。N.S.Odashima(2002)用ELISA法診斷不同的患者群血清中抗體的種類,發(fā)現(xiàn)ELISA—lgG敏感度zui高,分別達到88.5%和93.2%,這說明該方...

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